用途溫和裂解細胞提取總蛋白質(zhì),主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等，非變性組織細胞裂解液
注意事項：主要由Triton X-100、氯化鈉、Tris組成,Triton X-100為最常用的去污劑之一。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
儲存條件和保質(zhì)期—20℃,12個月
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
1、取 Triton X-100 Lysi s Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2、去培養(yǎng)液，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF 的裂解液的比例加入Triton X-100 Ly sis
Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于細胞1～3s內(nèi)，細胞就會被裂解。通常6孔板每孔細胞加入150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1、取Triton X-100 Lysi s Buffer 室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
2、低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
3、用手指輕彈細胞，使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150～250μl 含有PMSF的裂解液的比例，加入Leagene Triton X-100 Lysi s Buffer。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。
4、10000～12000g， 4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
1、取TritonX-100LysisBuffer室溫溶解混勻后，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
2、把組織剪切成細小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
4、按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。
5、步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的TritonX-100LysisBuffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
7、進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
